ハロウィーンにつき、研究室内のどこかに隠れたメンバー(の似顔絵付きのお菓子)を探すイベントが開催されました。イタズラされないよう頑張って探して、全員見つけました。
イラスト(by 白鳥さん)は、皆さんの特徴をよく捉えていていいですね。
大金
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メタ情報
ハロウィーン@大金研
大金が共著の論文がJCI Insightに掲載されました
大金が共著に入った論文が、JCI Insightに掲載されました。基本的には共同研究者の研究ですが、化合物面で寄与している研究です。
Azaria, R. D.; Correia, A. B.; Schache, K. J.; Zapata, M.; Pathmasiri, K. C.; Mohanty, V.; Nannapaneni, D. T.; Ashfeld, B. L.; Helquist, P.; Wiest, O.; Ohgane, K.; Li, Q.; Fredenburg, R. A.; Blagg, B. S. J.; Cologna, S. M.; Schultz, M. L.*; Lieberman, A. P.*
Mutant Induced Neurons and Humanized Mice Enable Identification of Niemann-Pick C1 Proteostatic Therapies.
JCI Insight 2024, 9 (20), e179525. (オープンアクセス) https://doi.org/10.1172/jci.insight.179525.
ニーマンピック病C型は細胞内へのコレステロールの蓄積を特徴とする遺伝性難病です。リソソームのコレステロールトランスポーターであるNPC1に変異が入り、機能が失われることで起こります。私たちのグループでは、NPC1変異体がフォールディング異常を起こしていることに着目し、NPC1変異体を安定化し、フォールディングを助ける化合物 (薬理学的シャペロン)を以前に報告しています。
今回の研究では、ヒトiPS細胞から分化させた神経様細胞において、これまでに報告のあるプロテオスタシスレギュレーター (タンパク質のフォールディング過程に影響を与える化合物)の効果を検証したところ、私たちの報告した薬理学的シャペロンmo56HCが明確な効果を示したことを報告しています。
また、新しいモデルマウスについても報告しています。ニーマンピック病C型のモデルマウスはすでに存在していましたが、マウスのNPC1とヒトのNPC1は配列が異なるため (86%は同一)、ヒトで頻度の高いI1061T変異体 (1061番目のイソロイシンがスレオニンに変わった変異体)において、ヒトNPC1で見られるフォールディング異常が見られず、薬理学的シャペロン等の評価ができないという課題がありました。
この研究では、ヒトNPC1のI1061T変異体を持つモデルマウスを作出し、ニーマンピック病C型の病態を再現することを報告しています。また、論文中でin vivoでの効果は検討されていませんが、このモデルマウス由来の細胞において薬理学的シャペロンmo56HCが明確な作用を示すことを報告しています。
培養細胞レベルで効果があることと個体レベルで効果があることには大きな違いがありますが、個体レベルで薬理学的シャペロンの効果を検証できるようになったことで、今後、個体レベルで使える化合物の探索や開発が進むものと期待できます。
大金
もろもろお疲れ様のケーキ会
夏の4年生の院試前休み+院試+1ヶ月の教育実習、M2のコロキウム(学科の授業としての文献紹介セミナー)のお疲れ様会として、ケーキ会をしました。
定番のタルト屋さんです。
4年生の二人はしばらく不在で、M1もインターンなど就活関連で不在なことが多かったので、久しぶりに人が多い日でした。
大金
GFPのゲル内リフォールディングの論文がbioRxivで公開
大金研の研究がプレプリントサーバーbioRxivで公開されました。B4白鳥さん、M1露木さん、卒業生の川端さんが寄与してくれている研究です。
#なお、プレプリントとは、学術雑誌での査読前の原稿を公開したもので、専門家による査読を通過していないという点で学術雑誌に掲載済みの論文とは異なります。査読・修正には通常数ヶ月以上かかること、学術雑誌は契約していないと読めないことなどがあり、研究の加速と誰でも情報にアクセスできるようにするという目的で、査読前の段階の原稿をオープンにする制度が整備されてきています。
緑色蛍光タンパク質 (green fluorescent protein, GFP)は、特定のタンパク質を蛍光で光らせて可視化できることから、生命科学研究で広く利用されています。ただし、タンパク質でできていることから、加熱により変性させると蛍光を失う性質があります。そのため、タンパク質の電気泳動法であるSDS-PAGEで分離した後に目的のタンパク質を検出することはできません (通常のサンプルをボイルするプロトコルでは)。今回プレプリントで公開した論文では、加熱により変性したGFPをSDS-PAGE後のゲル内でリフォールディングさせる簡便な方法を報告しています。
In-gel refolding allows fluorescence detection of fully denatured GFPs after SDS-PAGE
非加熱のSDS-PAGEやNative-PAGEなどの電気泳動法では、タンパク質の立体構造や修飾状態などさまざまな要因で移動度が変化しますが、通常の変性SDS-PAGEでは主に分子量に応じた分離ができるという利点があります。これまで、GFPの蛍光検出を電気泳動後に行う場合、非加熱SDS-PAGEやNative-PAGEが用いられてきましたが、「分子量」通りに泳動されない欠点があります。ゲル内リフォールディングを用いる方法では、この欠点を回避できます。
現時点では、EGFPやGFPuv、superfolder GFP (とそのmonomeric変異体)、turboGFPなどでリフォールディングできることが確認できており、turboGFPとsuperfolder GFP (monomeric変異体)では他のタンパク質との融合タンパク質の状態でもリフォールディング可能です。Total protein stainingやその後のウェスタンブロッティングとも併用可能なので、用途・目的によっては便利に使える方法ではないかと考えています。
大金